靶向Pik3cb shRNA表达载体的构建及其对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

作     者：刘苏健 马丽 邓勇志 孙宗全 陈家军 苏刚 

作者机构：山西医科大学第二医院心胸外科太原030001 华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科 

基　　金：山西省科技攻关项目(042025-1) 山西省回国留学人员科研资助项目(74-2003) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2007年第24卷第6期

页      码：712-714页

摘      要：目的构建大鼠Pik3cb shRNA真核表达载体,并检测其下调大鼠血管平滑肌细胞Pik3cb mRNA表达的效应。方法根据Genbank中大鼠Pik3cb序列设计并合成两条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆导入载体pGenesil-1,酶切鉴定和测序无误后分别命名为pU6- Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2。通过脂质体转染大鼠胸主动脉平滑肌细胞,确定转染效率;通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Pik3cb mRNA的表达;TUNEL法检测细胞凋亡。结果pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2经测序和PCR扩增与原序列相同,转染大鼠平滑肌细胞48 h时转染率为15.7%,荧光定量PCR结果显示转染组Pik3cb mRNA表达明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),TUNEL结果显示转染组凋亡细胞明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建重组真核表达质粒pU6-Pik3cb-shRNA,并有效下调大鼠胸主动脉平滑肌细胞Pik3cb mRNA的表达,为靶向Pik3cb防治移植血管再狭窄的基因治疗奠定了基础。

主 题 词：RNA干扰 质粒 平滑肌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1001-9030.2007.06.025

馆 藏 号：203855563...