携带DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒包装质粒pSANV2.0的构建

作     者：陈敏 项红兵 田玉科 CHEN Min;XIANG Hong-bing;TIAN Yu-ke

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院湖北武汉430030 广州中医药大学附属第二医院广东广州510120 

出 版 物：《肿瘤学杂志》 (Journal of Chinese Oncology)

年 卷 期：2011年第17卷第1期

页      码：30-33页

摘      要：[目的]构建携带DREAM基因小分子干扰RNA(siRNA)的腺相关病毒载体包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,为进一步研究DREAM基因在癌痛基因治疗中的作用奠定基础。[方法]设计并合成包含DREAM短发夹序列(shRNA)两条互补的寡核苷酸链,退火后插入到经过EcoRⅠ和SalⅠ双酶切的pDC316-EGFP-U6质粒的EcoRⅠ和SalⅠ位点,得到重组质粒pDC316-EGFP-DREAMshRNA-U6,然后以其为模板,通过PCR扩增DREAMshRNA-EGFP片段,并引入EcoRⅠ和SalⅠ位点,PCR产物与pSANV2.0经EcoRⅠ和SalⅠ酶切后连接得到重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,转化入感受态大肠杆菌DH-5α,获得阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定。[结果]PCR、酶切鉴定以及测序结果证实,插入的片段序列和位点完全正确,重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP的构建成功。[结论]成功构建携带DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP。

主 题 词：DREAM 重组腺相关病毒 包装质粒 RNA干扰 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203857018...