细菌内同源重组法构建pAd-EGFP-hSDF-1α腺病毒质粒

作     者：唐俊明 黄永章 郭凌郧 潘国栋 孔霞 杨建业 王家宁 TANG Jun-ming;HUANG Yong-zhang;GUO Ling-yun;PAN Guo-dong;KONG Xia;YANG Jian-ye;WANG Jia-ning

作者机构：郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所 

基　　金：湖北省自然基金资助项目(2005ABA079) 湖北省卫生厅项目(JX2B68) 湖北省教育厅项目(Q200524003 B200624006) 

出 版 物：《郧阳医学院学报》 (Journal of Yunyang Medical College)

年 卷 期：2006年第25卷第4期

页      码：193-197,F0002页

摘      要：目的:利用细菌内同源重组法构建和制备含人基质细胞源衍生因子-1α(hSDF-1α)重组腺病毒质粒。方法:设计5 端分别具有EcoR V/Xho I酶切位点的扩增hSDF-1αcDNA片段上下游引物,聚合酶链反应法(PCR)从pORF-hSDF-1α质粒中扩增hSDF-1α的cDNA,插入pGEM-T Easy载体中,构建pGEM-T-hSDF-1α质粒,EcoR V/Xho I双酶切后回收279 bp片段,与经过相同酶切的8.8 kb pShuttle-IRES-hrGFP-2进行连接,连接产物转化感受态DH5α,挑选克隆,重组质粒pShuttle-EGFP-hSDF-1α用EcoR V/Xho I酶切鉴定。pShuttle-EGFP-hSDF-1α经Pm e I酶切线性化后,转化含pAdeasy-1的超感受态B J5183,采用细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAd-EGFP-hSDF-1α;pAd-EGFP-hSDF-1α质粒经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定。结果:线性化的pShuttle-EGFP-hSDF-1α转化含pAdeasy-1的超感受态B J5183,重组质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5 kb的片段,PCR反应扩增出了279 bp的片段。结论:用细菌内同源重组成功地构建了含hSDF-1αcDNA的重组腺病毒质粒,为进行表达hSDF-1α的重组腺病毒的制备及hSDF-1α在骨髓源干细胞动员迁移中的作用研究奠定了基础。

主 题 词：同源重组, T载体 人基质细胞源衍生因子-1 腺病毒 增强型绿色荧光蛋白 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-9674.2006.04.001

馆 藏 号：203865845...