新孢子虫NcSAG4基因克隆及原核表达

作     者：李赫 丁鹤 李建华 刘畅 宫鹏涛 王伟利 杨举 张国才 张西臣 

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 

基　　金：吉林省科技发展计划项目(No.20100222) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2012年第7卷第6期

页      码：446-448,463页

摘      要：目的构建新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法根据新孢子虫NcSAG4基因序列设计特异性引物,以新孢子虫总核酸为模板PCR扩增目的片段,与pMD-18-T连接,构建克隆载体pMD-NcSAG4,经双酶切后回收目的片段,与表达载体pGEX-T连接,构建原核表达载体pGEX-NcSAG4,用IPTG诱导,通过SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。结果成功构建了新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体pGEX-Nc-SAG4;SDS-PAGE电泳显示,在IPTG诱导下阳性菌高效表达了分子质量单位为18.79ku的蛋白质;Western blot显示表达产物可被抗新孢子虫的多克隆血清识别。结论成功构建了NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,为建立经济、实用的诊断新孢子虫病的ELISA方法奠定了基础。

主 题 词：新孢子虫 NcSAG4基因 克隆 原核表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.2012.06.005

馆 藏 号：203866050...