粘质沙雷氏菌膜结合葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及其酶学特性

作     者：王贝贝 李昊聪 孙文敬 崔凤杰 王大明 钱静亚 齐向辉 WANG Beibei;LI Haocong;SUN Wenjing;CUI Fengjie;WANG Daming;QIAN Jingya;QI Xianghui

作者机构：江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 江西省德兴市百勤异VC钠有限公司江西德兴334221 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31571885) 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD) 国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2012AA022103) “十三五”国家重点研发计划重点专项(2017YFC1600806) 江西省科技计划项目(赣知发64号) 江西省创新团队建设计划项目(20142BCB24024) 江西省科技平台建设计划项目(2010DTZ01900) 德兴市科技计划项目(德科发44号) 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2019年第40卷第24期

页      码：101-109页

摘      要：经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4 倍的膜结合葡萄糖酸脱氢酶(gluconate dehydrogenase,GADH)。研究结果表明,粘质沙雷氏菌膜结合GADH由3 个亚基组成,其分子质量分别为65.0、45.0 kDa和23.0 kDa左右,是一种含有细胞色素C的黄素蛋白,能够催化氧化葡萄糖酸为2KGA。粘质沙雷氏菌膜结合GADH的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH 5.0,在30 ℃以下、pH 5.0~6.0的条件下较为稳定;该酶具有严格的底物特异性,只有在D-葡萄糖酸作为底物时才具有催化活性,其Km值为1.33 mmol/L;一些金属离子(如Fe3+、Cu2+ 和Zn2+ )、有机溶剂(乙醇、异丙醇、甲醇和丙酮)、变性剂(十二烷基硫酸钠和巯基乙醇)以及有机酸(草氨酸和草酸)对膜结合GADH的催化活性具有明显的抑制作用。研究为粘质沙雷氏菌2KGA生物合成的过程优化与控制提供了一定的理论依据。

主 题 词：粘质沙雷氏菌 2-酮基葡萄糖酸 膜结合葡萄糖酸脱氢酶 分离纯化 酶学特性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 08[工学] 0703[理学-化学类] 082203[082203] 0822[工学-核工程类] 

核心收录：

D　O　I：10.7506/spkx1002-6630-20181110-121

馆 藏 号：203870412...