基于全菌SELEX技术副溶血性弧菌适配体筛选及鉴定

作     者：楼秀芹 俞骅 汪皓秋 张蔚 刘涛 王旭初 LOU Xiu-qin;YU Hua;WANG Hao-qiu

作者机构：杭州市疾病预防控制中心 

基　　金：浙江省医药卫生科技计划项目(2014KYA189) 杭州市重大科技项目农业与社会发展科研主动设计项目(20162013A03) 

出 版 物：《中国公共卫生》 (Chinese Journal of Public Health)

年 卷 期：2019年第35卷第12期

页      码：1718-1723页

摘      要：目的筛选并鉴定可用于实验室快速检测副溶血性弧菌的适配体序列。方法利用全菌SELEX技术,通过人工合成全长86 bp、中间含40 bp随机核苷酸序列的单链DNA文库,筛选与副溶血性弧菌高效结合的适配体,对候选适配体序列进行特异性分析,并评估其二级结构和Kd值。结果第4轮筛选即出现比较明显的产物富集,继续筛选至第12轮结束。经克隆和测序后得到5条候选适配体序列(F2、F5、F6、F19、F30),它们与副溶血性弧菌的结合率分别为68.8%,68.8%,73.1%,65.2%和72.7%;特异性实验显示,5条候选适配体均能与副溶血性弧菌高效结合,与5种其它常见致病菌则结合不明显;用DNA folding form对5条候选核酸适配体序列进行二级结构模拟,结果显示,其二级结构以茎环(凸环和圆环)为主,茎环结构中的茎多由G-C配对组成;采用荧光分析法对5条候选适配体的Kd值进行分析测定,其对靶细菌的解离常数分别为15.88、15.24、9.13、4.12和25.39 nM。结论全菌SELEX技术可用于副溶血性弧菌适配体筛选,5条候选适配体与靶细菌结合力强,特异性高。

主 题 词：副溶血性弧菌 核酸适配体 SELEX技术 全菌SELEX技术 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.11847/zgggws1120138

馆 藏 号：203871530...