非洲爪蛙Klf4基因新转录本的克隆及功能研究

作     者：曹青 徐西兵 刘浩 刘晨 CAO Qing;XU Xi-bing;LIU Hao;LIU Chen

作者机构：河南科技大学医学遗传学教研室河南洛阳471000 南京医科大学医学遗传学系江苏南京211166 

基　　金：河南科技大学博士启动基金项目(13480027) 南京医科大学科技发展基金重点项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,2015NJMUZD002) 江苏省高校自然科学研究面上项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,16KJB180020) 江苏省自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,BK20171053) 国家自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,81702747) 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2019年第29卷第6期

页      码：519-524页

摘      要：[目的]克隆非洲爪蛙Klf4基因的新转录本,并研究其在早期胚胎发育中的功能。[方法]提取胚胎总RNA,反转录构建c DNA文库。从Xenbase数据库中获得Klf4的基因组序列,分析序列发现新的ATG位点,设计引物、PCR扩增,将扩增的目的片段插入p CS2+,插入位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序鉴定,发现载体中插入的目的片段为编码483个氨基酸的Klf4的新转录本。体外转录获得mRNA,显微注射入胚胎,进行表型分析以及原位杂交检测。[结果]成功克隆出了Klf4基因的新转录本;过表达该转录本,表型分析发现胚胎发育异常,原位杂交检测发现Xag2和Dkk1的表达上升。[结论]成功克隆编码483个氨基酸的Klf4基因的新转录本,过表达该转录本胚胎发育异常,Xag2和Dkk1的表达被激活。

主 题 词：Klf4 转录本 非洲爪蛙 早期胚胎发育 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.06.0085

馆 藏 号：203871861...