副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定

作     者：黄晓慧 辛伟 魏建忠 连凯琪 郑海学 朱启运 才学鹏 李郁 

作者机构：安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 

基　　金：安徽省自然科学基金项目(11040606M89) 家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题(SKLVEB2011HZKFKT013) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2012年第42卷第10期

页      码：1053-1057页

摘      要：为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。

主 题 词：副猪嗜血杆菌 转铁结合蛋白A基因 原核表达 鉴定 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2012.10.002

馆 藏 号：203873198...