环介导等温扩增快速检测临床常见曲霉菌方法的建立和应用

作     者：鲁勇 汪一萍 应建飞 俞燕红 贺明阳 Lu Yong;Wang Yiping;Ying Jianfei;Yu Yanhong;He Mingyang

作者机构：宁波市鄞州人民医院检验科315040 

基　　金：宁波市自然科学基金资助项目(2011A610047) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2014年第37卷第2期

页      码：140-143页

摘      要：目的建立一种环介导等温扩增（LAMP）反应快速检测临床常见曲霉菌方法。方法根据GenBank上提交的烟曲霉（登录号AY660917）、土曲霉（登录号AF454183）、黄曲霉（登录号AF454158）以及黑曲霉（登录号AF454169）菌的特异28SrRNA基因序列比对后的相对保守区设计特异LAMP引物，分别提取标准曲霉、临床对照菌株以及临床标本DNA，然后以LAMP技术扩增靶基因，通过反应体系中的荧光染料显色作用，直接肉眼观察结果。并将每种曲霉菌约10。孢子加入到正常对照血清中模拟临床标本，用LAMP方法进行检测验证。结果15种非曲霉菌属以及人全血基因组的LAMP和PCR检测结果均为阴性、30份临床非曲霉菌血液感染标本以及10份正常对照血清标本的LAMP检测结果也均为阴性，无非特异反应发生。4种上述标准曲霉菌属的LAMP和PCR检测结果均为阳性；每种曲霉菌的双份共8份模拟临床标本，约含10。孢子，经LAMP检测也均为阳性。另对系列每反应管分别含有500、50、5、0．5、0．05Pg模板进行灵敏度分析，LAMP最低检测限可达到0．05～0．5pg每反应管。结论LAMP是一种简便、快速、特异和敏感的检测方法，可以用来检测临床和环境标本中的常见曲霉菌属。（中华检验医学杂五占，2014，37：140—143）

主 题 词：曲霉菌属 核酸扩增技术 敏感性与特异性 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.02.016

馆 藏 号：203873762...