节瓜ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

作     者：杜旋 刘娜 鲁博 Du Xuan;Liu Na;Lu bo

作者机构：上海市农业科学院设施园艺研究所上海市设施园艺技术重点实验室上海201403 上海市农业科学院农业科技信息研究所上海201403 

基　　金：上海市农业科学院卓越团队项目资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2019年第17卷第23期

页      码：7794-7800页

摘      要：为了探索适用于节瓜ISSR-PCR反应的反应体系以及得到适用于该体系的ISSR引物,首先利用正交实验的方法对节瓜ISSR-PCR反应体系的三因素(模板,2×san Taq PCR mix预混液,引物)的工作浓度进行优化。然后依据Tm值的差异将引物分成了三组,每组分别设定不同的退火温度,以节瓜基因组DNA为模板进行PCR扩增,经2%琼脂糖凝胶电泳和UVP成像,结果表明,第二组引物扩增条带的数目、清晰度明显优于第一组和第三组的引物扩增的条带,第二组45℃退火条件下的扩增情况明显优于在40℃退火条件下的扩增。因此,通过实验与分析,确定了节瓜ISSR-PCR反应体系是DNA模板(50 ng/μL)2μL、2×san Taq PCR mix预混液10μL、引物(10μmol/L)1μL,筛选到了18条适合在节瓜的ISSR-PCR反应中应用的引物,其最适合的退火温度是45℃。

主 题 词：节瓜(Benincasa hispida Cogn.var.chieh-qua How.) ISSR-PCR 正交设计 引物筛选 退火温度 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090202[090202] 

D　O　I：10.13271/j.mpb.017.007794

馆 藏 号：203878581...