人miR-331-3p 慢病毒表达载体的构建及其在HER-2阳性乳腺癌细胞中的表达

作     者：黄前川 艾翠方 丁进亚 HUANG Qianchuan;AI Cuifang;DING Jinya

作者机构：中部战区总医院检验科湖北武汉430070 

基　　金：湖北省卫生健康委科研联合项目(WJ2018H0075) 

出 版 物：《华南国防医学杂志》 (Military Medical Journal of South China)

年 卷 期：2019年第33卷第12期

页      码：803-806页

摘      要：目的构建miR-331-3p慢病毒表达载体,并检测其在人表皮生长因子2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)高表达乳腺癌细胞系SKBR3中的表达情况。方法根据miR-331-3p基因序列设计并合成1对miR-331-3p的oligo DNA,退火形成双链与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体相连后扩增,将扩增产物GFP-miR-331-3p与pLenti6.3-MCS/V5 DEST连接构建慢病毒表达载体pLenti6.3-miR-331-3p;用脂质体将pLenti6.3-miR-331-3p及包装质粒共转染293T细胞形成Lenti-miR-331-3p,收集上清Lenti-miR-331-3p后感染293T细胞株进行滴度鉴定;将Lenti-miR-331-3p转染HER-2高表达乳腺癌细胞SKBR3,荧光显微镜观察荧光阳性细胞百分率,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测miR-331-3p表达水平。结果经PCR扩增测序证实,成功构建携带人miR-331-3p慢病毒表达载体Lenti-miR-331-3p,并测得滴度>10~9TU/ml;荧光显微镜下SKBR3的荧光阳性率>90%,qPCR检测证实miR-331-3p转染SKBR3后获得了高表达。结论成功构建人miR-331-3p慢病毒表达载体,并可在乳腺癌细胞SKBR3高效表达,为后续验证miR-331-3p靶向调控癌基因HER-2的表达和功能奠定了实验基础。

主 题 词：乳腺癌 微小RNA 人表皮生长因子2 慢病毒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13730/j.issn.1009-2595.2019.12.001

馆 藏 号：203878615...