AEP环化酶的高效原核诱导表达与活性检测体系的建立

作     者：胡晓韵 何华华 彭文舫 HU Xiaoyun;HE Huahua;PENG Wenfang

作者机构：湖北大学生命科学学院省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室 

基　　金：湖北省自然科学基金(2017CFB538)资助 

出 版 物：《湖北大学学报（自然科学版）》 (Journal of Hubei University：Natural Science)

年 卷 期：2020年第42卷第1期

页      码：20-26页

摘      要：天冬酰胺内切酶(AEPs)可催化短肽形成结构异常稳定的环肽,其具有药物设计框架的应用前景.将来源于白花蛇舌草(Oldenlandia affinis)中AEP(OaAEP1 b)环化酶(cyclase)基因采用融合标签表达的策略在大肠杆菌菌株BL21中进行诱导表达,并比较了不同的融合标签麦芽糖结合蛋白(MBP),N-utilization substance A(NusA),小泛素修饰蛋白(SUMO),绿色荧光蛋白(GFP)以及泛素(ubiquitin)对AEP环化酶表达量的影响.结果表明,MBP标签对AEP的表达促进作用最强,达到(3.6±0.05)mg/L,是目前文献报道的2倍.体外酶切实验证实该环化酶可对融合表达的底物蛋白MBP-Kalata B1-6 His-GST进行有效切割,但连接反应过程有待验证.本研究对AEP环化酶进行肽工程研究与应用奠定了较好的基础,并提供了一套高效的研究工具.

主 题 词：AEP环化酶 环化肽 大肠杆菌 融合表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-2375.2020.01.003

馆 藏 号：203878680...