禽致病性大肠杆菌O1、O2、O78血清型三重PCR检测方法的建立

作     者：王娟芳 戴建君 姜敏 任建鸾 李德志 张鹏 孙建和 汤芳 WANG Juanfang;DAI Jianjun;JIANG Min;REN Jianluan;LI Dezhi;ZHANG Peng;SUN Jianhe;TANG Fang

作者机构：南京农业大学动物医学院/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 

基　　金：国家重点研发计划项目(2016YFD0500800) 江苏省自然科学基金优秀青年基金项目(BK20180075) 上海市兽医生物技术重点实验室开放基金(klab201709) 

出 版 物：《南京农业大学学报》 (Journal of Nanjing Agricultural University)

年 卷 期：2020年第43卷第1期

页      码：108-115页

摘      要：[目的]本试验旨在建立一种能同时检测禽致病性大肠杆菌O1、O2和O 783种血清型的三重PCR检测方法。[方法]根据O1、O2和O 783种血清型的特异性基因片段设计并合成引物,分别提取O1、O2和O 78血清型禽致病性大肠杆菌的DNA作为模板,优化三重PCR反应条件,进行特异性和敏感性检测,并对临床模拟样品进行检测。[结果]在三重PCR的25μL反应体系中,dNTP 1.5μL,MgCl 22.5μL,Taq DNA酶0.6μL,O1、O2、O78最佳引物加入量分别为0.6、0.2、0.6μL;最佳退火温度为55.9℃。三重PCR的特异性好,3种血清型之间无交叉反应;对146株不同血清型的大肠杆菌进行检测,准确率为99.32%(145/146),用金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和枯草芽胞杆菌进行特异性检测时,没有出现非特异性扩增。三重PCR敏感性高,以单一血清型DNA为模板时,O1和O2血清型的DNA最低检测限均为0.1 ng·μL^-1,O 78血清型的DNA最低检测限为0.02ng·μL^-1;以O 1、O2和O78混合DNA为模板时,最低检测限为0.05ng·μL^-1。对18份临床模拟样品进行检测,准确率为94.4%(17/18)。[结论]建立了一种能同时检测O1、O2和O783种血清型禽致病性大肠杆菌的三重PCR方法,方法特异性好,敏感性高,适用于临床上禽大肠杆菌病的快速检测。

主 题 词：三重PCR 禽致病性大肠杆菌 血清型 特异性 敏感性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090603[090603] 0830[工学-生物工程类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.7685/jnau.201811032

馆 藏 号：203878682...