血管内皮生长因子(VEGF)实时荧光定量PCR质粒标准品的构建

作     者：刘丽仙 霍金龙 李颖 赵跃 霍海龙 曾养志 LIU Li-xian;HUO Jin-long;LI Ying;ZHAO Yue;HUO Hai-long;ZENG Yang-zhi

作者机构：云南农业职业技术学院畜牧兽医系云南昆明650212 云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南昆明650201 昆明医学院第二附属医院整形外科云南昆明650101 

基　　金：云南省应用基础研究计划面上项目(2010ZC241) 云南农业职业技术学院科学研究与技术开发项目 昆明医学院研究生创新基金项目(2009S03) 

出 版 物：《云南农业大学学报（自然科学版）》 (Journal of Yunnan Agricultural University:Natural Science)

年 卷 期：2011年第26卷第3期

页      码：328-333页

摘      要：应用SYBR Green荧光染料检测方法构建VEGF基因质粒标准品,能快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要候选基因血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。本研究利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪,提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,进行RT-PCR扩增。纯化目的片段并与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR。建立的VEGF基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法特异性较好,检测灵敏度可达1.0×103拷贝,线性范围达1.0×103～1.0×108拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系(r2=0.982),扩增效率高(E=96.92%)。通过构建版纳微型猪近交系VEGF基因质粒标准品,为探讨VEGF基因在临床多种疾病中所发挥的分子机理奠定基础。

主 题 词：实时荧光定量 VEGF基因 质粒标准品 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-390X(n).2011.03.008

馆 藏 号：203881124...