靶向cortactin基因的shRNA重组质粒的构建和筛选

作     者：袁岱岳 邵伟斌 郝清亚 严栋梁 朱建伟 YUAN Daiyue;SHAO Weibin;HAO Qingya;YAN Dongliang;ZHU Jianwei

作者机构：南通市第一人民医院普外科南通226311 南通大学附属医院普外科南通226311 

基　　金：南通市卫生局青年科研基金项目(WQ2014004) 

出 版 物：《肿瘤防治研究》 (Cancer Research on Prevention and Treatment)

年 卷 期：2015年第42卷第10期

页      码：984-987页

摘      要：目的构建靶向cortactin基因的sh RNA重组质粒,并筛选出沉默cortactin基因效果最明显的sh RNA重组质粒。方法设计并合成3对针对cortactin基因不同位点的sh RNA片段,构建相应的重组质粒(命名为p BSilence1.1-cortactin-sh RNA1-3),并进行酶切鉴定和测序分析。通过脂质体转染方法将各重组质粒及阴性对照质粒分别转染至人肝癌Hep G2细胞中,转染24 h后荧光显微镜下观察各组细胞的转染情况,并采用RT-PCR检测各组细胞m RNA的表达情况。结果构建的重组质粒经酶切鉴定与测序分析证实完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,3组重组质粒组Hep G2细胞的cortactin基因m RNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。与p BSilence1.1-cortactin-sh RNA1和p BSilence1.1-cortactin-sh RNA2两组相比,p BSilence1.1-cortactinsh RNA3组的cortactin基因m RNA表达降低更加显著(P<0.05)。结论成功构建并筛选的重组质粒能有效抑制Hep G2细胞中cortactin基因m RNA表达,为下一步研究沉默cortactin基因对肝癌细胞生物学行为的影响提供了实验基础。

主 题 词：Cortactin 短发夹状RNA RNA干扰 肝癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3971/j.issn.1000-8578.2015.10.007

馆 藏 号：203881497...