转基因水稻潮霉素标记基因PCR检测方法的建立及其在基因水平转移研究中的应用

作     者：沈立明 吴永宁 周萍萍 张建中 魏晓丽 SHEN Li-ming;WU Yong-ning;ZHOU Ping-ping;ZHANG Jian-zhong;WEI Xiao-li

作者机构：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所 中国疾病预防控制中心传染病控制所北京102206 中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101 

基　　金：国家科技部973计划(2001CB109001) 国家科技部863计划(2002AA212041) 

出 版 物：《中国食品卫生杂志》 (Chinese Journal of Food Hygiene)

年 卷 期：2006年第18卷第3期

页      码：193-196页

摘      要：为建立用于基因水平转移研究,尤其是DNA经加工和消化后稳定性研究的针对转基因水稻潮霉素标记基因hpt(hygromycinphos photransferase)的定性和实时定量PCR体系,设计针对hpt的上游通用引物多个片段定性PCR扩增体系,以植物叶绿体基因rbcl为内对照,PCR扩增产物经测序验证。将定性PCR中最小片段(236bp)连接到质粒载体pUC18pMDT载体上,提取质粒经验证后做外标。应用TaqMan—MGB荧光探针和引物,建立定量的外标校正曲线法,并评价方法的精密度。建立的定性PCR体系能稳定扩增出236bp～910bp不同大小的5个hpt片段,并经测序验证。实时定量PCR的线性范围为105～10拷贝(R2=0.998),最低能检出10拷贝,重复性好。本研究已成功建立了用于转基因水稻标记基因hpt基因水平转移研究的定性和定量PCR系统。

主 题 词：植物,转基因 基因 基因水平转移 聚合酶链反应 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-8456.2006.03.001

馆 藏 号：203881553...