羊口疮病毒ORF019基因的克隆及表达

作     者：沈岩尔 贾怀杰 王晓霞 陈国华 何小兵 房永祥 薛慧文 景志忠 SHEN Yan-er;JIA Huai-jie;WANG Xiao-xia;CHEN Guo-hua;HE Xiao-bing;FANG Yong-xiang;XUE Hui-wen;JING Zhi-zhong

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃兰州730046 兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所甘肃兰州730000 

基　　金：“十三五”国家重点研发计划项目(2017YFD0500903 2016YFD0500907) 

出 版 物：《甘肃农业大学学报》 (Journal of Gansu Agricultural University)

年 卷 期：2019年第54卷第6期

页      码：1-7页

摘      要：【目的】克隆、分析羊口疮病毒(ORFV)的ORF019基因,进而表达、纯化和鉴定重组表达产物.【方法】根据GenBank登录的ORFV OV-SA00株(AY386264)E2L基因序列设计1对引物,以提取的ORFV/QH02/2010株基因组DNA为模板,通过PCR获得该毒株的ORF019基因,将该基因连接至原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET-32a-ORF019,并对其测序,测序结果与副痘病毒属及其脊椎动物痘病毒亚科代表毒株的E2L蛋白进行一致性分析;并转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-32a-ORF019,读码框正确;生物信息学分析发现,ORF019基因在副痘病毒属各成员间高度保守,也在脊椎动物痘病毒亚科痘病毒的遗传进化过程中保留了相对稳定的氨基酸残基;获得了约100 ku的融合蛋白表达产物,并以包涵体的形式存在于宿主菌.【结论】成功对ORFV019基因进行系统的遗传演化分析,并利用原核表达系统获得了重组表达产物.

主 题 词：羊口疮病毒 ORF019基因 进化分析,原核表达 纯化 

学科分类：0907[农学-草药学] 090705[090705] 09[农学] 

D　O　I：10.13432/j.cnki.jgsau.2019.06.001

馆 藏 号：203881690...