苹果轮纹病菌LAMP快速检测方法的建立

作     者：汪少丽 曲恒华 王英姿 王培松 栾炳辉 王冠华 WANG Shaoli;QU Henghua;WANG Yingzi;WANG Peisong;LUAN Binghui;WANG Guanhua

作者机构：山东省烟台市农业科学研究院烟台265500 烟台市果茶工作站山东烟台264001 烟台大学生命科学学院山东烟台264005 

基　　金：山东省现代农业产业技术体系果品产业创新团队病虫防治与质量控制岗位专家(SDAIT-06-11) 山东省重点研发计划(2017CXGC0214) 

出 版 物：《植物保护学报》 (Journal of Plant Protection)

年 卷 期：2020年第47卷第1期

页      码：127-133页

摘      要：为建立快捷、灵敏检测苹果轮纹病菌Botryosphaeria dothidea的环介导等温扩增(loop-medi‐ated isothermal amplification,LAMP)检测方法,以其内转录间隔区ITS序列为靶标,设计6条LAMP引物,对其特异性进行检测,优化反应条件并建立苹果轮纹病菌的LAMP检测方法。引物特异性检测结果表明,2株苹果轮纹病菌反应结果呈绿色为阳性,而其它3株对照菌株反应结果呈橙色为阴性,表明了LAMP检测引物的高特异性。优化后的LAMP最佳反应条件:温度65℃、扩增时间60 min、FIP/BIP、F3/B3、LF/LB引物终浓度分别为1.0、0.25、0.5μmol/L。LAMP检测方法对苹果轮纹病菌DNA的检测灵敏度达到了100 ag/μL,是常规PCR检测灵敏度的100倍。田间疑似轮纹病组织检测结果发现LAMP方法对苹果轮纹病菌的检出率高达68%,而传统分离鉴定方法的检出率仅为24%。表明所建立的苹果轮纹病菌LAMP快速检测方法简便快捷、特异性好、灵敏度高,尤其适用于基层植保机构对于苹果轮纹病菌的田间快速检测。

主 题 词：苹果轮纹病菌 内转录间隔区(ITS) 环介导等温扩增(LAMP) 快速检测 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

核心收录：

D　O　I：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2020.2019031

馆 藏 号：203882022...