利用桥梁载体策略构建水稻条斑病菌T3SS基因诱导表达检测体系

作     者：吾尼尔别克·美丽 杨小菲 张翠萍 杨瑞环 李生樟 李逸朗 陈功友 陈晓斌 邹丽芳 WUNIERBIEKE Mei-li;YANG Xiao-fei;ZHANG Cui-ping;YANG Rui-huan;LI Sheng-zhang;LI Yi-lang;CHEN Gong-you;CHEN Xiao-bin;ZOU Li-fang

作者机构：上海交通大学农业与生物学院上海200240 

基　　金：国家重点研发计划资助(2017YFD0200400) 国家自然科学基金(31470235 31772122) 

出 版 物：《植物病理学报》 (Acta Phytopathologica Sinica)

年 卷 期：2019年第49卷第6期

页      码：846-856页

摘      要：水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoc)侵染水稻,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)。Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)编码的III型分泌系统(type III secretion system,T3SS)将效应蛋白注入水稻细胞中,激发寄主水稻的感(抗)病性。为了准确在Xoc中进行T3SS基因表达调控的分析,本研究设计出桥梁载体策略,将目标基因的启动子或者功能片段构建在高拷贝的桥梁载体,获得融合表达元件,通过亚克隆的方式将融合元件转入骨架载体上,获得用于转录表达和蛋白表达分析的载体。为了验证该策略的可行性,选取hrpG、hrpX和hrcC基因构建了相应的启动子探针载体和蛋白表达载体,将这些载体导入毒性调控子基因trh、lrpX和zur的突变体中,GUS活性测定、荧光定量PCR以及蛋白免疫杂交结果显示:在trh、lrpX和zur的突变体中,hrpG、hrpX和hrcC的转录表达水平、mRNA水平和蛋白表达水平呈现一致。这表明这套桥梁载体策略能够有效应用于T3SS基因转录表达和蛋白表达的分析。综上所述,运用桥梁载体能够克服低拷贝载体DNA遗传操作效率低的缺陷,这一策略也适用于毒性相关基因调控机理的研究,这将为Xoc-水稻互作研究提供高效的工作系统。

主 题 词：水稻条斑病菌 T3SS基因 启动子探针载体 蛋白表达载体 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

核心收录：

D　O　I：10.13926/j.cnki.apps.000390

馆 藏 号：203884009...