利用CRISPR/Cas9构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293/K562细胞株

作     者：张虹洋 舒逸 朱丹 张佳 邹琳 张鹏辉 ZHANG Hongyang;SHU Yi;ZHU Dan;ZHANG Jia;ZOU Lin;ZHANG Penghui

作者机构：重庆医科大学附属儿童医院临检中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆)儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆市干细胞治疗工程技术研究中心重庆400014 

基　　金：重庆市社会民生科技创新专项(批准号:Cstc2016shmszx130032)资助的课题 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2019年第41卷第12期

页      码：2263-2272页

摘      要：该文旨在利用CRISPR/Cas9构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293/K562细胞株,为G6PD缺陷症及其修复研究提供细胞模型。针对G6PD基因c.1388G>A位点设计单链向导RNA(sg RNA)与突变同源臂,利用CRISPR/Cas9联合同源重组修复(HDR)构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293细胞株与红白血病K562细胞株;qRT-PCR、Western blot检测G6PD基因表达;CCK8检测细胞增殖;G6PD/6PGD比值法检测G6PD酶活性;结晶紫染色与Annexin V-APC/7-AAD验证突变细胞株对氧化活性药物维生素K3与伯安喹的耐受情况。结果显示,成功构建CRISPR/Cas9双质粒载体系统;筛选单克隆细胞经测序鉴定显示,成功构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293与K562细胞株,且无脱靶;进一步发现,c.1388G>A突变不影响HEK293与K562细胞G6PD基因mRNA转录与蛋白翻译,但细胞增殖减慢,G6PD酶活性下降;突变HEK293细胞对维生素K3与伯安喹的耐受力减弱,突变K562细胞对伯安喹耐受能力减弱。该研究成功构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293与K562细胞株,为G6PD缺陷症及后期基因修复研究提供细胞模型。

主 题 词：G6PD缺陷症 c.1388G>A CRISPR/Cas9 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 100201[100201] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.11844/cjcb.2019.12.0002

馆 藏 号：203885162...