沉默beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡的影响

作     者：张怡 靳晓飞 周晓红 董贤慧 张颖 于文涛 成媛 高维娟 ZHANG Yi;JIN Xiao-fei;ZHOU Xiao-hong;DONG Xian-hui;ZHANG Ying;YU Wen-tao;CHENG Yuan;GAO Wei-juan

作者机构：河北中医学院河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室石家庄050091 

基　　金：国家自然科学基金(81873180) 河北省研究生创新资助项目(CXZZBS2018154) 河北省政府资助临床医学优秀人才培养和基础课题研究项目(〔2017〕46号-2) 河北省教育厅课题(QN2017111) 河北省中医药管理局科研计划项目(QN2017008) 

出 版 物：《解剖学报》 (Acta Anatomica Sinica)

年 卷 期：2020年第51卷第1期

页      码：3-8页

摘      要：目的探讨beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常组(normal)、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)模型组(model)、beclin1基因沉默组(beclin1^-/-)、转染对照组(control)。除normal组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。利用RNAi技术,针对小鼠c DNA序列设计beclin1干扰序列,用脂质体Lipo2000包裹后转染至HT22细胞。于转染48 h后用荧光显微镜观察转染效率,Western blotting检测细胞beclin1表达情况。各组细胞均于复氧复糖24 h后采用CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,免疫荧光染色检测Bax、Bcl-2表达及比值变化,Western blotting检测LC3、P62及Caspase-3表达。SPSS 19. 0统计学软件进行数据分析。结果与normal组相比,model组细胞活力及P62蛋白表达显著降低(P<0. 01),乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Caspase-3表达及Bax/Bcl-2均显著升高(P<0. 01)。与model组相比,beclin1^-/-组细胞活力及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著降低(P<0. 01),LDH漏出率、Bax/Bcl-2及P62、Caspase-3表达显著升高(P<0. 01);control组与model组比较差异无显著性。结论沉默beclin1抑制细胞自噬可使缺氧缺糖/复氧复糖处理的HT22细胞损伤加重,细胞凋亡进一步增加。

主 题 词：Beclin1 基因沉默 缺氧缺糖/复氧复糖 自噬 免疫印迹法 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100104[100104] 100204[100204] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16098/j.issn.0529-1356.2020.01.001

馆 藏 号：203885831...