大鼠半乳凝素9基因克隆及真核表达载体的构建

作     者：李来邦 李立 冉江华 李晓延 曹海鹰 王谦 张升宁 赵永恒 李铸 刘静 Li Lai-bang;Li Li;Ran Jiang-hua;Li Xiao-yan;Cao Hai-ying;Wang Qian;Zhang Sheng-ning;Zhao Yong-heng;Li Zhu;Liu Jing

作者机构：昆明医学院附属昆明市第一人民医院云南省昆明市650011 昆明医学院附属昆明市第一人民医院肝胆胰一科及云南省器官移植研究所肝移植研究中心云南省昆明市650011 

基　　金：云南省科技厅社会发展项目基金资助项目(2007CA007)~~ 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2009年第13卷第24期

页      码：4717-4720页

摘      要：背景:研究提示,半乳凝素9在介导细胞分化、凋亡、黏附、细胞间聚集、炎症反应的调控方面发挥作用,但其作用机制尚不明确。目的:克隆大鼠半乳凝素9基因片段,构建pDC316-GFP-Galectin-9真核表达质粒,以进一步了解半乳凝素9各种功能和反应机制,设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-11/2009-01在北京本元正阳基因技术有限公司完成。材料:SPF级雄性Lewis大鼠1只。方法:采用反转录聚合酶链反应技术,从大鼠肝脏组织中扩增出大鼠半乳凝素9基因片段,通过基因重组技术将该基因片段重组到pDC316-GFP真核表达载体上,构建pDC316-GFP-Galectin-9重组质粒,通过用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。主要观察指标:重组质粒的鉴定结果。结果:总RNA经RT-PCR扩增后,经琼脂糖凝胶电泳,在1kb下方可见一条明显扩增的条带,与预计的半乳凝素9-cDNA长度相符。重组质粒经NotⅠ/HindⅢ双酶切和未作酶切的重组质粒pDC316-GFP-Galectin-9一起经琼脂糖凝胶电泳,前者出现了980bp和5.8kb2条带(980bp为Galectin-9-cDNA产物,5.8kb为pDC316-GFP线状质粒),后者出现6.7kb条带(重组质粒pDC316-GFP-Galectin-9),初步表明重组质粒构建成功。测序结果用NCBI上的BLAST进行比对分析,其核酸序列与GeneBank中的半乳凝素9的mRNA的编码序列(NM_012977)同源性完全相符,进一步证实所克隆的基因为大鼠半乳凝素9-cDNA。结论:成功克隆了半乳凝素9基因并构建成其真核表达质粒。

主 题 词：半乳凝素9 基因克隆 真核表达载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 1010[医学-医学技术类] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-8225.2009.24.024

馆 藏 号：203887092...