皮内注射用卡介苗特异性鉴别试验多重PCR检测方法的建立及验证

作     者：刘朝阳 石玮 马雷钧 程鹏飞 LIU Zhao-yang;SHI Wei;MA Lei-jun;CHENG Peng-fei

作者机构：上海生物制品研究所有限责任公司质量检定室上海201403 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2020年第33卷第2期

页      码：179-183页

摘      要：目的建立皮内注射用卡介苗(Bacillus Calmette Guerin vaccine,BCG)特异性鉴别试验的多重PCR法,并进行验证。方法根据GenBank登录的Pasteur 1173P2株序列(AM408590. 1)设计并合成引物,以制备的BCG特异性鉴别试验国家参考品(简称BCG鉴别参考品)DNA为模板,多重PCR法扩增其特异性缺失区RD1,产物经3%琼脂糖凝胶电泳鉴定,验证方法的重复性、中间精密度、特异性、耐用性及灵敏度;采用该方法检测8批皮内注射用BCG供试品。结果 BCG鉴别参考品在重复检测6次、2名检测人员分别重复检测3 d、不同PCR退火温度及不同DNA聚合酶加量时均扩增出约200 bp的核酸片段;最低可检10 pg/mL的目的基因,仅对结核分枝杆菌H37Rv及皮内注射用BCG样品DNA扩增出特异性条带。经该方法检测,8批供试品PCR产物电泳均可见单一的目的条带,无RD1序列存在,大小与BCG鉴别参考品一致。结论多重PCR法的重复性、中间精密度、特异性、耐用性及灵敏度良好,可应用于皮内注射用BCG特异性鉴别试验。

主 题 词：皮内注射用卡介苗 鉴别试验 多重PCR法 验证 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.002985

馆 藏 号：203887304...