非洲爪蛙prmt5.L基因的克隆及时空表达谱分析

作     者：曹青 刘浩 沈滟 刘晨 CAO Qing;LIU Hao;SEHN Yan;LIU Chen

作者机构：河南科技大学医学院遗传教研室河南洛阳471003 南京医科大学医学遗传学系江苏南京211166 

基　　金：河南科技大学博士启动基金项目(13480027) 南京医科大学科技发展基金重点项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,2015NJMUZD002) 江苏省高校自然科学研究面上项目(“磷酸化Sufu在胚胎发育及肿瘤发生发展中的作用”,16KJB180020) 江苏省自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,BK20171053) 国家自然科学基金青年基金项目(“泛素E3连接酶SPOP下调抑癌因子Sufu在肾癌发生发展中的作用和机制”,81702747) 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2020年第30卷第1期

页      码：1-6页

摘      要：[目的]克隆非洲爪蛙prmt5.L基因并分析其在胚胎发育中的时空表达谱。[方法]收集胚胎,提取总RNA,反转录制备c DNA。设计特异引物,PCR扩增prmt5.L基因的ORF序列,连接到p CS2+载体构建p CS2+prmt5.L重组质粒,连接位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序验证成功构建p CS2+prmt5.L重组质粒。将p CS2+prmt5.L重组质粒用EcoRⅠ酶切,T7 RNA聚合酶转录获得prmt5.L的反义探针。收集不同时期的爪蛙胚胎,固定并脱水后经原位杂交检测prmt5.L在胚胎发育中的表达情况。通过序列比对和进化树分析PRMT5在进化中的保守性。[结果]成功克隆非洲爪蛙prmt5.L基因,原位杂交检测了prmt5.L在早期胚胎中的时空表达谱。序列比对和进化树发现prmt5.L蛋白在进化中非常保守。[结论]成功构建了p CS2+prmt5.L重组质粒。prmt5.L基因在胚胎发育中呈现动态表达且prmt5.L蛋白在进化中非常保守。

主 题 词：prmt5.L 非洲爪蛙 胚胎发育 基因表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-311x.2020.01.0001

馆 藏 号：203888145...