多重PCR-毛细管电泳检测儿童5种腹泻病毒的方法建立及应用

作     者：蔡德丰 陈运生 朱纯青 孟青 肖丽霞 田洁 马东礼 CAI Defeng;CHEN Yunsheng;ZHU Chunqing;MENG Qing;XIAO Lixia;TIAN Jie;MA Dongli

作者机构：深圳市儿童医院检验科深圳518038 亚能生物技术(深圳)有限公司深圳518000 

基　　金：广东省医学科学技术研究基金(C2017031) 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2020年第38卷第1期

页      码：15-18页

摘      要：目的:建立肠道腺病毒(Adv)、诺如病毒G1及G2型(NoV G1和NoV G2)、A组轮状病毒(RV A)、扎如病毒(SV)及星状病毒(HAstV)5种儿童腹泻病毒多重PCR-毛细管电泳法检测体系。方法:针对Adv、NoV G1、NoV G2、RV A、SV及HAstV保守序列设计特异性引物,设计并优化腹泻病毒的多重PCR-毛细管电泳检测体系,琼脂糖凝胶电泳确认扩增片段;进行性能(灵敏度、特异性)评估;收集185例儿童病毒样腹泻样本,采用多重PCR-毛细管电泳体系进行检测,并通过测序验证阳性结果。结果:所设计引物特异性扩增出5种腹泻病毒;多重PCR-毛细管电泳检测体系检出限为102~103 copies/μL,CV均<10%;其他腹泻病原体未出现交叉反应,无明显的非特异杂峰,特异性较好;185例临床病毒样腹泻样本检测阳性132例(71.35%),其中RV A 105例(56.8%)、Adv 22例(11.9%)、SV 15例(8.1%)、NoV G211例(5.9%)和HAstV 10例(5.4%),其中包括双病毒感染样本;毛细管电泳进样量需20μL,3 h内完成全部分析;测序结果与GeneBank比对分析,序列一致。结论:成功建立一种能够快速筛查5种常见儿童腹泻病毒的多重PCR-毛细管电泳检测方法。

主 题 词：儿童 腹泻病毒 多重PCR 毛细管电泳 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2020.01.04

馆 藏 号：203888745...