环介导等温扩增技术检测呼吸道样本中肺炎克雷伯菌

作     者：司玉莹 赵望 叶蓓 成宇 张雯雁 叶杨芹 王玉超 王岚 范列英 SI Yuying;ZHAO Wang;YE Bei;CHENG Yu;ZHANG Wenyan;YE Yangqin;WANG Yuchao;WANG Lan;FAN Lieying

作者机构：同济大学附属东方医院检验科上海200120 复旦大学环境科学与工程系上海200438 

基　　金：上海市科学技术委员会基础研究重大专项(17JC1401000、17441902400) 上海市科学技术委员会“科技创新行动计划”(16441906500) 国家科技重大专项(2017ZX10302401-004-005) 浦东新区卫生和计划生育委员会重点学科建设(PWZxk2017-09) 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2020年第38卷第1期

页      码：56-59,65页

摘      要：目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系。结果:8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg^2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89%)高于培养法(42.20%),差异有统计学意义(χ^2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15%、100%、65.25%,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95%(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817)。结论:与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法。

主 题 词：环介导等温扩增技术 呼吸道感染 肺炎克雷伯菌 细菌培养法 DNA测序技术 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2020.01.15

馆 藏 号：203889625...