RNA干扰抑制γ突触核蛋白的表达对人结肠癌细胞株增殖和侵袭能力的影响

作     者：黄峰 许少华 叶青 郑秋红 许扬梅 刘沁颖 Huang Feng;Xu Shaohua;Ye Qing;Zheng Qiuhong;Xu Yangmei;Liu Qinying

作者机构：福建省肿瘤医院胃肠肿瘤外科福州350014 

出 版 物：《中华胃肠外科杂志》 (Chinese Journal of Gastrointestinal Surgery)

年 卷 期：2016年第19卷第4期

页      码：446-452页

摘      要：目的探讨抑制γ突触核蛋白（SNCG）基因表达对结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响。方法针对SNCG基因的mRNA序列（GENBANK：***003087．2），设计合成干扰SNCG基因表达的RNA（siRNA）有效靶序列及其DNA，与慢病毒骨架质粒GV115（hU6-MCS-CMV—EGFP）连接并包装．获得实验组慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP，并用相同步骤构建阴性对照组慢病毒LV-SNCG-NCIEGFP。用两种重组慢病毒分别感染人结肠癌SW1116细胞（实验组：RNAi组，阴性对照组：NC组），荧光显微镜下观察感染后shRNA荧光标签（EGFP）的表达情况；利用实时定量聚合酶链反应（***）检测RNAi组与NC组细胞中SNCG基因表达mRNA的干扰效果；以野生型SW1116细胞为空白对照（野生型组），用Westernblot方法检测RNAi组、NC组和野生型组细胞中SNCG基因表达蛋白的干扰效果；CCK．8细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验和Transwell侵袭实验．用于评价RNA干扰SNCG基因表达对RNAi组与NC组细胞的体外生长及侵袭能力的抑制作用。结果成功构建并获得了稳定表达重组慢病毒的SW1116细胞株，表达慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP及LV-SNCG-NC-EGFP滴度均为8×10^8Tu／ml。RNAi组SNCG基因相对表达水平（2-△△△）为0．114±0．030，低于于对照NC组的SNCG基因相对表达水平（2-△△Q：1．009±0．161），差异有统计学意义（P=0．009）；RNAi组SNCG基因干扰效率达到76．8％。RNAi组的SNCG蛋白相对表达量为12．001±2．884，低于NC组（蛋白相对表达量：32．445±4，731）和野生型组（蛋白相对表达量：34．308±6．920），差异有统计学意义（P=0．018，P=0．020）。CCK-8细胞增殖实验显示，干扰SNCG基因表达后，RNAi组细胞的体外增殖能力从48h开始受到明显抑制，并持续到120h，与NC组及野生型组差异具有统计学意义（P=0．036）。RNAi组克隆明显偏小，RNAi组平均直径（0．582±0．103）mm，低于NC组[（1．863±0．316）mm]及野生型组[（1．749±0．525）mm]，差异具有统计学意义（P=0．003）；RNAi组克隆形成率为（17．1±3．5）％，低于NC组[（36．5±4．3）％]及野生型组[（33．8±3．9）％]，差异具有统计学意义（尸=O．013，P=0．019）。RNAi组的侵袭个数为（37．4±9．3）个，较NC组[（112．3±8．6）个]及野生型组[（100．0±0．0）个]明显减少，差异具有统计学意义（P=0．008，P=0．007）。而NC组及野生型组在细胞增殖能力、克隆形成数量及侵袭能力方面的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论SNCG基因表达在结肠癌细胞的生长和侵袭能力方面具有重要作用。

主 题 词：结肠肿瘤 SNCG基因 慢病毒载体 RNA干扰 基因转染 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1671-0274.2016.04.021

馆 藏 号：203890192...