HEV保护性基因工程抗体的制备及功能研究

作     者：李冰 杨婷婷 唐奇 冯振卿 杨永林 陈宇 LI Bing;YANG Tingting;TANG Qi;FENG Zhenqing;YANG Yonglin;CHEN Yu

作者机构：南京医科大学第一附属医院麻醉科江苏南京210029 南京医科大学国家卫健委抗体技术重点实验室江苏南京211166 南京医科大学附属南京医院感染性疾病科江苏南京210006 

基　　金：中国博士后科学基金(1851) 南京市医学科技发展项目(ZKX15051) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2020年第40卷第3期

页      码：342-347页

摘      要：目的:制备抗戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)的人鼠嵌合基因工程抗体并研究其中和保护作用及特性。方法:将已获得的抗HEV鼠源单克隆抗体基因序列进行优化,设计人鼠嵌合的工程化抗体基因序列,将其克隆入真核表达载体;表达载体共转染293F细胞进行表达优化,高效制备基因工程化抗体;通过酶联免疫反应(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、免疫荧光及HEV细胞感染模型,研究工程化抗体的结合能力及中和活性。结果:成功构建基因工程化人鼠嵌合HEV保护性抗体表达载体,在293F表达系统中实现高效表达。抗体表达产率达30 mg/L,亲和力为1.202×10^-8mol/L。免疫荧光检测结果显示抗体能够灵敏、特异地与已感染HEV的Kernow细胞结合,实时荧光定量PCR检测结果显示抗体可保护易感的C3A细胞不被HEV感染。结论:基因工程化抗体抗体具有高效的HEV结合能力及中和作用,能有效阻断HEV感染,并实现低成本高效表达。

主 题 词：HEV 人鼠嵌合基因工程抗体 单克隆抗体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20200308

馆 藏 号：203891554...