绵羊NYD-SP27基因的原核表达及生物信息学分析

作     者：李娜 吴雨红 袁利明 张晓晓 赛务加甫 LI Na;WU Yuhong;YUAN Liming;ZHANG Xiaoxiao;Saiwujafu

作者机构：石河子大学动物科技学院石河子832003 

基　　金：国家自然科学基金项目(31460683) 自然基金地区科学基金项目(31860725) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第47卷第3期

页      码：645-654页

摘      要：本研究旨在对绵羊NYD-SP 27基因进行克隆和原核表达,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。根据GenBank中绵羊NYD-SP 27基因序列(登录号:KX905090)设计1对特异性引物,通过PCR方法扩增目的基因片段,构建pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒并转化*** DH5α感受态细胞,提质粒进行双酶切鉴定,将鉴定正确的pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒转化*** BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定,并利用生物信息学方法对NYD-SP 27基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,试验成功扩增出大小为1617 bp的NYD-SP 27基因片段,并经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切获得大小为5400和1617 bp的两条片段,表明成功构建了pET-22b(+)-NYDSP27重组质粒,诱导表达重组蛋白大小约60 ku,主要以包涵体的形式存在。NYD-SP27蛋白分子式为C 2798 H 4319 N 737 O 819 S 19,原子总数为6892,理论等电点(pI)为6.16,为酸性蛋白,不稳定系数为46.96,属于不稳定蛋白,总平均亲水性为-0.403。该蛋白无跨膜结构,无信号肽,含有45个潜在的磷酸化位点和24个抗原表位;NYD-SP27蛋白二级结构中的α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲分别占26.21%、3.90%、18.03%和51.86%。本试验结果可为深入研究绵羊NYD-SP27蛋白的作用机理提供理论依据。

主 题 词：NYD-SP 27基因 原核表达 生物信息学分析 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.03.001

馆 藏 号：203893100...