铜绿假单胞菌flgE基因PCR检测方法的初步建立

作     者：宫强 杜珍奇 冯礼尚 樊泽军 冯洋洋 孙鹏飞 程梦琦 Gong Qiang;Du Zhenqi;Feng Lishang;Fan Zejun;Feng Yangyang;Sun Pengfei;Cheng Mengqi

作者机构：河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心河南洛阳471023 

基　　金：河南科技大学SRTP项目(2019178) 

出 版 物：《现代畜牧兽医》 (Modern Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第3期

页      码：1-6页

摘      要：为建立一种基于铜绿假单胞菌flgE基因的PCR检测方法,本试验根据GenBank中已发表的铜绿假单胞菌flgE基因序列,设计合成了1对特异性引物,由铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增获得了目的基因。从退火温度、循环次数、Mg2+浓度、dNTPs浓度和引物浓度5个方面优化了反应条件,并检测了该方法的特异性和敏感性。结果成功扩增出了铜绿假单胞菌1 400 bp的flgE特异性基因片段,最佳退火温度、循环次数、Mg2+浓度、dNTPs浓度和引物浓度分别为56℃、30个循环、1.6 mmol/L、0.2 mmol/L和0.3μmol/L。特异性试验表明,仅铜绿假单胞菌中可扩增出目的片段,而多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中均未扩增出相应片段。敏感性试验结果表明,本方法可检测到最低10 pg/μL的铜绿假单胞菌基因组DNA以及100 CFU/mL的病原菌。

主 题 词：铜绿假单胞菌 flgE基因 PCR 检测方法 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203893826...