重组人肿瘤坏死因子a衍生物3a的克隆与表达

作     者：娄永华 焦炳华 周丙荣 王梁华 余伟民 朱玉平 

作者机构：第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室 

基　　金：国家"九五"科技攻关计划重大项目 (96- C0 2 - 0 1 - 0 2 ) 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2002年第23卷第2期

页      码：125-128页

摘      要：目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。 方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p BL载体 ,转化大肠杆菌 DH5α,获得表达 rh- TNFα- D3a的工程菌。 结果 :经巨引物二轮 PCR获得表达 TNFα突变蛋白的基因突变 ,经序列测定结果与设计一致 ,重组蛋白表达量占细菌总蛋白 18.0 % ,大部分为可溶性 ,占 rh- TNFα- D3a总量的 6 0 %以上。重组蛋白经纯化 ,纯度 >98%。 rh- TNFα- D3a对 L 92 9细胞表现出较高的细胞毒性 ,比活性大于 5× 10 8IU / mg。与野生型的 rh- TNFα相比 ,rh- TNFα- D3a的毒性降低为野生型的 1/ 10 ,同时其保留了 TNFα的抗肿瘤活性。 结论 :rh- TNF-αD3a是一个毒性较低 。

主 题 词：点突变 聚合酶链反应 重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a 克隆 rh-TNF α-D3a 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0258-879X.2002.02.003

馆 藏 号：203894161...