鱼类神经坏死病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

作     者：罗卫 李惠芳 刘荭 陈焕春 范万红 刘宗晓 田飞焱 王侃 吕建强 LUO Wei;LI Hui-fang;LIU Hong;CHEN Huan-chun;FAN Wan-hong;LIU Zong-xiao;TIAN Fei-yan;WANG Kan;LU Jian-qiang

作者机构：深圳出入境检验检疫局广东深圳518001 华中农业大学湖北武汉430070 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AA100306) 深圳出入境检验检疫局科研项目(SZK33-2005) 

出 版 物：《中国水产科学》 (Journal of Fishery Sciences of China)

年 卷 期：2008年第15卷第3期

页      码：506-510页

摘      要：根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了用于检测鱼类神经坏死病毒的实时荧光RT-PCR方法。利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其他多种常见的水生动物RNA病毒,结果只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.2pg/μL的总RNA。与RT-PCR的灵敏度对比试验表明,其敏感度比RT-PCR高100倍。对同一样品进行检测,在组内及组间的变异系数分别为0.9%以及1.5%,证实其重复性极好,并且从抽提核酸到得出结果仅需4h。对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测,结果发现有40份阳性样品。这些结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高的优点,是开展鱼类神经坏死病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。

主 题 词：鱼类神经坏死病毒 实时荧光RT-PCR 检测方法 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1005-8737.2008.03.019

馆 藏 号：203896884...