番茄褪绿病毒TaqMan荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

作     者：王吉成 李洁 丁天波 褚栋 WANG Ji-Cheng;LI Jie;DING Tian-Bo;CHU Dong

作者机构：青岛农业大学植物医学学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室山东青岛266109 

基　　金：国家自然科学基金项目(31872030,31401809) 泰山学者建设工程专项(tsqn20161040) 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2020年第63卷第2期

页      码：159-165页

摘      要：【目的】本研究旨在建立TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR)技术,快速检测单头烟粉虱Bemisia tabaci体内的番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)。【方法】根据ToCV外壳蛋白保守序列设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了TaqMan RT-qPCR方法;与常规PCR检测进行比较,检测该方法的灵敏度与特异性;并应用该方法对单头烟粉虱成虫体内ToCV进行了快速检测。【结果】本研究构建的TaqMan RT-qPCR检测ToCV的标准曲线,其循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,扩增效率为98%。该方法对ToCV的最低检测浓度为8.3×10 copies/μL,灵敏度是常规RT-PCR的1000倍。该方法与田间番茄两种重要病毒番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)和番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)检测无交叉反应。单头烟粉虱成虫ToCV检测结果表明,温室内ToCV侵染植株上烟粉虱携毒率为100%,田间烟粉虱的携毒率为30%。【结论】本研究建立的TaqMan RT-qPCR检测方法,可快速有效检测单头烟粉虱体内ToCV携毒情况,为该病毒病的防控提供了技术支撑。

主 题 词：番茄褪绿病毒 烟粉虱 外壳蛋白 携毒率 扩增效率 TaqMan RT-qPCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.16380/j.kcxb.2020.02.005

馆 藏 号：203896904...