洪湖碘泡虫SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用

作     者：罗丹 赵媛莉 刘新华 章晋勇 LUO Dan;ZHAO Yuan-Li;LIU Xin-Hua;ZHANG Jin-Yong

作者机构：中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室农业部淡水养殖病害防治重点实验室淮安中心武汉430072 中国科学院大学北京100049 

基　　金：湖北省自然科学基金重点项目(2018CFA074) 江苏省农业科技自主创新基金项目(CX(17)2017) 国家自然科学基金面上项目(31772411) 日本五峯生命科学国际基金资助 

出 版 物：《水生生物学报》 (Acta Hydrobiologica Sinica)

年 卷 期：2020年第44卷第2期

页      码：268-274页

摘      要：洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)引起的鲫“喉孢子虫病”严重危害我国异育银鲫养殖。病原丰度是决定病害发生的最重要因素之一,因此建立洪湖碘泡虫的定量检测方法,不仅可用于异育银鲫“喉孢子虫病”的早期诊断,也可应用于养殖系统中洪湖碘泡虫的定量监测,为该病的暴发风险预警及防控措施的效果评价提供技术手段。研究根据洪湖碘泡虫的ITS基因序列,设计合成一对特异性引物HHF/R,建立了洪湖碘泡虫的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性及应用性进行了验证。结果显示,该方法能特异性检测出洪湖碘泡虫,而与多涅茨尾孢虫、倪李碘泡虫、普洛宁碘泡虫、吴李碘泡虫之间无交叉反应;最低检测限为3.02×101copies/μL,灵敏性较常规PCR高出1000倍;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%。应用该方法可定量检出洪湖碘泡虫全生活史阶段,包括鱼体内移行发育的前孢子阶段及养殖系统环境,如池塘水样及底泥样品中分布的洪湖碘泡虫。因此,所建立的洪湖碘泡虫SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性稳定,可应用于异育银鲫全养殖阶段洪湖碘泡虫的定性、定量监测。

主 题 词：洪湖碘泡虫 异育银鲫 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 监测 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071001[071001] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.7541/2020.032

馆 藏 号：203897900...