Koutango病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

作     者：殷启凯 陈晓菁 付士红 刘文婧 李樊 雷雯雯 何英 许松涛 梁国栋 聂凯 王环宇 Xiaojing;Fu Shihong;Liu Wenjing;Li Fan;Lei Wenwen;He Ying;Xu Songtao;Liang Guodong;Nie Kai;Wang Huanyu

作者机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所虫媒室传染病预防控制国家重点实验室卫生健康委生物安全重点实验室北京102206 

基　　金：国家科技重大专项(No.2018ZX10711001) 传染病预防控制国家重点实验室重点项目(No.2015SKLID505) 

出 版 物：《疾病监测》 (Disease Surveillance)

年 卷 期：2020年第35卷第3期

页      码：197-201页

摘      要：目的建立Koutango病毒(KOUTV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载KOUTV基因序列,进行多序列比对分析,针对NS5基因中的高保守序列片段设计KOUTV的特异引物与探针,用4科9种病毒进行检测方法特异性验证,通过平行重复实验验证检测方法稳定性,利用体外转录的RNA标准品建立了KOUTV的NS5基因拷贝数的绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%,定量分析模型灵敏度达到1.0×10^2拷贝/反应。通过本研究建立的快速检测方法对新疆采集的112批,6328只蚊虫进行了测定,结果均为阴性。结论成功建立了KOUTV的高特异性、高敏感性的TaqMan RT-PCR检测方法,可应用于实验室和临床诊断。

主 题 词：Koutango病毒 TaqMan反转录聚合酶链式反应 分子检测 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3784/j.issn.1003-9961.2020.03.005

馆 藏 号：203898102...