CRISPR/Cas9技术构建 Vegf-b 敲除斑马鱼模型和心血管发育异常的初探

作     者：宋来思 赵海山 吴文富 冯启荣 谭文 SONG Laisi;ZHAO Haishan;WU Wenfu;FENG Qirong;TAN Wen

作者机构：广东工业大学生物医药学院广东广州510006 广东省人民医院医学研究部广东广州510080 

基　　金：中国博士后科学基金(402190011) 国家自然科学基金(500190191) 

出 版 物：《广东药科大学学报》 (Journal of Guangdong Pharmaceutical University)

年 卷 期：2020年第36卷第2期

页      码：225-230页

摘      要：目的使用CRISPR/Cas9技术构建血管内皮生长因子b(Vascular endothelial growth factor b,Vegf-b)敲除斑马鱼模型。方法设计CRISPR/Cas9位点,体外转录单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA)和Cas9 RNA,通过斑马鱼受精卵显微注射,评价sgRNA效率。对子代斑马鱼进行基因测序并筛选,最后获得基因敲除的纯合子斑马鱼Vegf-b-/-。结果针对1个基因位点设计并构建了2个sgRNA,选择效率最高的sgRNA1进行斑马鱼受精卵显微注射,获得嵌合体F0代胚胎,筛选出稳定遗传的founder。并进一步通过三代筛选鉴定获得可稳定遗传的Vegf-b敲除的斑马鱼系,通过荧光显微镜观察发现其血管发育和心脏形态异常。结论通过CRISPR/Cas9技术,可以稳定可靠的构建Vegf-b基因敲除斑马鱼,并证明Vegf-b影响斑马鱼体节间血管的发育和心脏功能,为后续Vegf-b功能研究奠定了重要的基础。

主 题 词：Vegf-b CRISPR/Cas9 斑马鱼 基因敲除 

学科分类：10[医学] 

D　O　I：10.16809/j.cnki.2096-3653.2019122301

馆 藏 号：203898130...