微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA

作     者：许艳芳 吕建新 

作者机构：温州医学院检验医学与公共卫生学院 

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目 (No .3975 10 ) 浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金资助项目 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2004年第20卷第10期

页      码：1950-1952页

摘      要：目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,对人iNOS -mRNA进行定量检测。方法 :设计两条特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端连接氨基 ,能与微孔板表面的NOS基团共价结合 ,“竖直”地包被在微孔中 ,另一个为检测探针 ,3’端带有生物素标记。用脂多糖 (LPS)刺激人外周血单个核细胞 2 4h后 ,提取巨噬细胞总RNA ,进行RT -PCR扩增 ,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内 ,并加入检测探针进行夹心杂交 ,最后加入亲和素 -辣根过氧化物酶 (AV -HRP)及底物 ,在 4 5 0nm波长检测杂交信号。结果 :该方法检测iNOS -mRNA的灵敏度明显高于RT -PCR -琼脂糖凝胶电泳 ;特异性高 ,RT -PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现 ;精密度良好。结论 :本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化 ,适合于iNOS

主 题 词：酶联夹心杂交 逆转录聚合酶链反应 一氧化氮合酶 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-4718.2004.10.053

馆 藏 号：203900731...