研究报告具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白TCS_(YFF-KR)的构建及原核表达

作     者：安群星 贾宁 张献清 陈蕤 夏爱军 易静 穆士杰 AN Qun-Xing;JIA Ning;ZHANG Xian-Qing;CHEN Rui;XIA Ai-Jun;YI Jing;MU Shi-Jie

作者机构：第四军医大学西京医院输血科陕西西安710032 解放军总医院感染管理与疾病控制科北京100853 

基　　金：陕西省科技计划项目(2003K10G9) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2008年第19卷第1期

页      码：5-7页

摘      要：目的:构建具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白(TCS),并将其在原核系统内进行表达与纯化。方法:借助计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(YFF81-83和KR173-174),并依此设计适当的突变引物;以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增双突变型TCS全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序;将所获阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western印迹鉴定;用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变型TCS蛋白进行纯化。结果:构建了突变型TCSYFF-KR,并获得了该蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化,产生大量均一的突变型TCS蛋白。结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了一条新途径。

主 题 词：天花粉蛋白 人类免疫缺陷病毒 定点突变 原核表达 纯化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2008.01.002

馆 藏 号：203901814...