多重PCR和反向线点杂交技术快速检测鲍曼不动杆菌21个主动外排基因及临床应用

作     者：金萍 肖克林 熊礼宽 卢月梅 吴劲松 吴丽娟 招悦 刘纯义 Jin Ping;Xiao Kelin;Xiong Likuan;Lu Yuemei;Wu Jinson;Wu Lijuan;Zhao Yue;Liu Chunyi

作者机构：深圳市宝安区妇幼保健院儿科重症监护病房广东深圳518133 深圳市宝安区妇幼保健院中心实验室广东深圳518133 深圳市人民医院检验科广东深圳518000 深圳市宝安区妇幼保健院检验科广东深圳518133 

基　　金：广东省医学科学技术研究基金资助项目(A2010561) 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2013年第34卷第12期

页      码：1489-1493,1496页

摘      要：目的建立一种新的多重PCR和反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测鲍曼不动杆菌21个主动外排基因的方法并评价其临床应用价值。方法根据GenBank中收录的多重耐药鲍曼不动杆菌AYE株5个外排泵蛋白基因家族,选取其中21个基因(4个来自MFS家族,13个来自RND家族,2个来自MATE家族,1个来自SMR家族,1个来自ABC家族)。设计22对引物及寡核苷酸探针(1对鲍曼不动杆菌通用引物及探针),mPCR同时扩增22个目的基因,PCR产物再与固定在尼龙膜上的特异性寡核苷酸探针反向线点杂交,同时检测上述22个基因。用该法对40株经过鉴定的鲍曼不动杆菌进行检测。结果除cmlA5和cmlA基因未检出阳性外,其余19个外排泵基因均呈阳性。除第16号菌株外排泵基因检测阴性外,其余39株鲍曼不动杆菌临床株携带外排泵基因数量从5～18个不等。外排系统在多重耐药菌株及相对敏感菌株中均有分布。11个外排泵基因在多重耐药鲍曼不动杆菌菌株中阳性率明显高于敏感株,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立的mPCR-RLB技术可快速同时检测鲍曼不动杆菌多个外排泵基因,短时间内明确菌株携带外排泵基因情况,对明确其多重耐药性的发生机制、避免药物成为外排泵对象、找到更有效的特异外排系统抑制剂均有重要意义。

主 题 词：聚合酶链反应 核酸杂交 鲍氏不动杆菌 多重药物流出泵基因 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4130.2013.12.001

馆 藏 号：203904258...