PHD2基因原核表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

作     者：杨丰旭 田晶 高鹏 许国旺 张卓然 YANG Feng-xu;TIAN Jing;GAO Peng;XU Guo-wang;ZHANG Zhuo-ran

作者机构：大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034 中国科学院大连化学物理研究所分离分析化学重点实验室辽宁大连116023 大连市微生物学会辽宁大连116033 

基　　金：辽宁省自然科学基金项目(2013020167) 国家自然科学基金项目(81372695) 

出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)

年 卷 期：2014年第26卷第6期

页      码：627-630页

摘      要：目的构建PHD2基因原核表达载体pET-43.1b(+)-PHD2,实现Nus-PHD2融合蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达。方法用SacⅠ酶切pET-43.1b(+)制备线性化载体,设计与线性化载体两端具有至少15个同源序列的特异性引物,以真核重组质粒pCMV6-Entry-EGLN1为模板,PCR法扩增PHD2目的基因。采用In-Fusion技术构建原核表达载体pET-43.1b(+)-PHD2,并将其导入大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达。用SDS-PAGE和Western blot分析并鉴定表达出的融合蛋白。用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白。结果成功构建了PHD2原核表达载体;SDS-PAGE结果显示融合蛋白以可溶性形式表达;Western blot鉴定表明融合蛋白可以与PHD2单克隆抗体特异性结合。结论实现了Nus-PHD2融合蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达,为PHD2生物学功能的研究奠定了基础。

主 题 词：PHD2 In-Fusion技术 Nus·Tag 大肠埃希菌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

D　O　I：10.13381/j.cnki.cjm.201406002

馆 藏 号：203904669...