大鼠肝细胞生长因子shRNA慢病毒载体的构建及其效应研究

作     者：张加敏 周祎 周士源 冯非儿 王谦明 朱晓璐 王辰骢 李浩 张晓辉 

作者机构：北京大学人民医院北京大学血液病研究所北京100044 

基　　金：国家科技支撑计划(No:2012BAI138B03) 国家自然科学基金(No:81270643) 教育部高等学校博士学科点专项科研基金(No:20120001110026) 北京市自然科学基金(No:7132194) 首都特色临床医学应用发展基金(No:Z111107058811024) 

出 版 物：《临床血液学杂志》 (Journal of Clinical Hematology)

年 卷 期：2014年第27卷第5期

页      码：783-786,789页

摘      要：目的:构建和鉴定大鼠肝细胞生长因子(HGF)shRNA慢病毒载体,为在分子水平进一步研究HGF对巨核细胞成熟与分化能力的影响提供方法。方法:设计并人工合成4对大鼠HGF的shRNA,与酶切后的GV115载体质粒连接,扩增后与辅助质粒共转染293T细胞,收取上清病毒液;PCR检测其在大鼠肾细胞内的干扰效应。结果:阳性克隆电泳结果为341bp,测序分析显示4组质粒中插入的核苷酸序列均为相应的大鼠HGF shRNA序列,GV115-shHGF质粒构建正确;慢病毒滴度为4×108 TU/ml。经PCR鉴定,4组shHGH慢病毒转染目的细胞后,与空白对照组比较,HGF相对表达量分别为:1.99、0.30、0.19、2.41。结论:靶向大鼠HGF的shHGF3慢病毒载体具有最佳的干扰HGF表达的效率。

主 题 词：肝细胞生长因子 巨核细胞 shRNA 慢病毒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.13201/j.issn.1004-2806.2014.09.012

馆 藏 号：203904951...