肿瘤坏死因子新型免疫抑制剂的构建、表达和鉴定

作     者：韩苇 赵宁 颜真 石继宏 张英起 

作者机构：第四军医大学生物技术中心陕西西安710032 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2003年第19卷第5期

页      码：397-400,405页

摘      要：目的 用鸡卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme,HEL)T辅助细胞表位序列替换hTNF-α3’末端序列,构建和表达hTNF-α新型免疫抑制剂。方法 将重组的hTNF-α HEL克隆、表达、纯化后进行初步的生物学活性鉴定。结果 DNA测序分析表明,重组的hTNF-α HEL3’末端序列与设计序列完全相同。将其插入pBV220表达载体中,重组菌经42℃诱导4h做SDSPAGE分析,结果显示该免疫抑制剂获得了表达,M_r为17000,其表达量为菌体总蛋白量的30％。Western blot结果证实,该表达蛋白可与抗TNF-α抗体产生免疫反应。对该表达蛋白进行了阴离子交换柱纯化,获得的重组蛋白的纯度可达95％以上。对该蛋白的体外杀伤活性检测表明,该蛋白已完全丧失了TNF-α的体外杀伤活性。结论 上述实验结果证明,TNF-α免疫抑制剂的构建获得了成功,该免疫抑制剂既保持了与TNF-α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性,为其下一步治疗作用的研究奠定了基础。

主 题 词：TNF-α 鸡卵清溶菌酶 T辅助细胞表位序列 免疫抑制剂 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-8861.2003.05.020

馆 藏 号：203905924...