K亚群禽白血病病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：王瑞明 都玉印 相英杰 郭龙宗 李玉燕 李阳 李建亮 赵鹏 王一新 崔言顺 WANG Rui-ming;DU Yu-yin;XIANG Ying-jie;GUO Long-zong;LI Yu-yan;LI Yang;LI Jian-liang;ZHAO Peng;WANG Yi-xin;CUI Yan-shun

作者机构：山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安271018 山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心山东泰安271018 山东益生种畜禽股份有限公司山东烟台264001 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266114 

基　　金：国家“十三五”重点研发计划资助项目(2018YFD0501404) 山东省自然科学基金博士基金资助项目(ZR2018BC047) 山东省“双一流”奖补资金项目(2017003) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第40卷第3期

页      码：524-529页

摘      要：根据K亚群禽白血病病毒(ALV-K)gp85基因序列设计1对引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ALV-K的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。该方法在1~10^7 copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到1copies/μL,是常规PCR方法的100倍。该方法与经典亚群ALV及其他常见禽免疫抑制病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2%。将ALV-K原型株JS11C1通过卵黄囊接种途径感染SPF鸡,运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法,对感染鸡体内各器官的病毒分布及病毒载量进行了检测。结果显示,在感染鸡的心脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官中均可检测到病毒,其载量无明显差异。结果表明,本试验所建立的实时荧光定量PCR方法具有敏感度高、特异性强和重复性好的优点,可用于ALV-K的快速、定量检测,该方法同时为ALV-K致病机制的研究提供了良好的技术手段。

主 题 词：K亚群禽白血病病毒(ALV-K) 实时荧光定量PCR 病毒载量 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.13

馆 藏 号：203906995...