慢病毒介导的低表达RNF20肝癌稳转细胞系的构建及其生物学功能分析

作     者：崔雅妮 王艳峰 孙俊宁 段静静 任来峰 苏文 CUI Yani;WANG Yanfeng;SUN Junning;DUAN Jingjing;REN Laifeng;SU Wen

作者机构：山西医科大学第二临床医学院太原030013 山西医科大学附属肿瘤医院研究所太原030013 

基　　金：山西省研究生教育创新项目(批准号:2019SY259) 山西省重点研发计划(社会发展)项目(批准号:201703D321013) 山西省卫生健康委科研课题(批准号:2018063) 山西省肿瘤医院研究所博士启动基金项目(批准号:201702) 国家自然科学基金项目(批准号:81272696)资助的课题 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2020年第42卷第2期

页      码：177-185页

摘      要：该文探讨了环指蛋白(RNF20)缺陷对肝细胞肝癌的细胞增殖和迁移的影响,及其可能的作用机制。针对RNF20基因设计3组短发夹RNA序列(RNF20-shRNA1、RNF20-shRNA2和RNF20-shRNA3),通过构建pLent-U6-GFP-Puro-shRNF20慢病毒载体,包装慢病毒后感染人肝癌细胞SMMC-7721和Huh7,经嘌呤霉素抗性筛选建立RNF20敲低的肝细胞肝癌稳转细胞系。同时,设感染对照慢病毒pLV-shCtrl-EGFP的对照组(shCtrl-7721/shCtrl-Huh7)。实时荧光定量PCR检测RNF20 mRNA表达,荧光显微镜观察其绿色荧光蛋白表达,免疫荧光染色法和蛋白免疫印迹法检测RNF20、T-Akt及p-Akt蛋白的表达情况,BrdU掺入实验及CCK-8法检测各组细胞增殖能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力,转录组测序分析基因转录水平。结果显示,RNF20-shRNA2对应肝癌细胞中的RNF20 mRNA表达最低,稳转细胞感染效率均高于85%,RNF20缺陷的SMMC-7721和Huh7较对照组细胞内RNF20、Wee1、p27、p53基因转录水平及RNF20蛋白表达水平明显降低,增殖与迁移能力明显增加,且p-Akt蛋白表达上调。Akt抑制剂派立福新处理的RNF20缺陷的肝癌细胞较未处理组增殖与迁移能力降低。实验结果提示,RNF20下调后促进肝癌细胞体外增殖与迁移,且其可能通过Akt通路进行调节。

主 题 词：RNF20 肝细胞肝癌 细胞增殖 细胞迁移 Akt 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.11844/cjcb.2020.02.0002

馆 藏 号：203908692...