查菲埃立克体120000表面抗原蛋白基因的克隆与表达

作     者：蹇锐 温博海 

作者机构：第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(39870042) 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2001年第23卷第8期

页      码：938-941页

摘      要：目的 构建查菲埃立克体特异性表面抗原 Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在 Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法 依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决定簇的基因片段，而后将ＰＣＲ产物用Ｔ载体克隆。用酶将ＰＣＲ产物从Ｔ载体切下，将它定向插入原核表达质粒ＰＥＴ１１Ｃ构建ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒；用重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）。结果 从ＤＮＡ片断中扩增出一约１１１９ ｂｐ产物，经测序为查菲埃立克体ｐ１２０基因。ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒转化的 Ｅ．ｃｏｌｉ在 ＩＰＴＧ的诱导下产生一分子量为４１０００的天然蛋白，它的产量占细菌蛋白总量的 ２８％，用免疫印迹分析证明它能特异地与查菲埃立克体感染病人血清反应。结论 查菲埃立克体特异性的Ｐ１２０抗原在原核表达系统被高效表达，该抗原的研制成功为制备人单核细胞埃立克体病诊断抗原和疫苗奠定了基础。

主 题 词：查菲埃立体体 表面抗原 基因表达 病原体 克隆 埃立克体病 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-5404.2001.08.020

馆 藏 号：203909655...