体外转录制备的siRNAs对SARS-CoV复制的抑制作用

作     者：石孝民 周高标 毛丽伟 姜曼 黎万玲 何仰东 吴玉章 倪兵 SHI Xiao-min;ZHOU Gao-biao;MAO Li-wei;JIANG Man;LI Wan-ling;HE Yang-dong;WU Yu-zhang;NI Bing

作者机构：解放军空军总医院泌尿外科北京100036 第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038 

基　　金：国家自然科学基金(30400437) 国家重点基础研究计划"973"项目SARS预防基础研究基金(2003CB514108)资助 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2005年第21卷第6期

页      码：438-441页

摘      要：目的体外研究针对SARSCoVRNA依赖性RNA聚合酶(RNAdependentRNApolymerase,RdRp)的小干扰RNA(SmallinterferenceRNA,siRNA)对SARSCoV感染的抑制效应。方法利用Ambion公司在线设计工具,设计出4条针对RdRp基因的siRNAs,并在体外利用试剂盒进行转录合成。在SARSCoV感染前1d,将这4条体外转录的siRNAs用Lipofectamine2000试剂转染入VeroE6细胞中。感染后,每天观察感染细胞的细胞病变效应(Cytopathiceffect,CPE)。第5天,用空斑形成实验(Plaqueformationunit,PFU)检测感染细胞培养上清液中SARSCoV滴度。结果CPE结果显示,在感染后的前4d,各siRNAs均能有效地保护细胞免受感染;在第5天,4条siRNAs中有3条仍能有效保护细胞不被感染。PFU实验结果显示,在第5天,所有siRNAs转染的细胞培养上清液中,SARSCoV的滴度均显著低于阳性对照(P<0.001)。结论实验结果表明针对SARSCoV的RdRp基因的siRNAs能有效而特异地抑制该病毒在哺乳动物细胞中的复制和繁殖,提示如果应用合适的给药途径,RNAi策略可以用于体内抑制SARSCoV的感染。

主 题 词：严重急性呼吸器官综合征 RNA干扰 RNA依赖性RNA聚合酶 小干扰RNA 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-8861.2005.06.002

馆 藏 号：203910772...