实时定量PCR检测外科发热患者静脉血中大肠杆菌DNA的方法

作     者：李云玖 马恩陵 廉东波 张立阳 王秀荣 何桂珍 蒋朱明 LI Yun-jiu;MA En-ling;LIAN Dong-bo;ZHANG Li-yang;WANG Xiu-rong;HE Gui-zhen;JIANG Zhu-ming

作者机构：中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院普通外科北京100730 

基　　金：卫生部临床学科重点项目基金(20010103) 北京市联合攻关项目基金(20021024) 

出 版 物：《中国临床营养杂志》 (Chinese Journal of Clinical Nutrition)

年 卷 期：2006年第14卷第2期

页      码：70-76页

摘      要：目的建立实时定量PCR(RQPCR)检测大肠杆菌DNA的方法,评估临床标本检测效果。方法选择大肠杆菌β右旋半乳糖苷酶基因作为检测靶基因设计引物和探针,采用HighPurePCRTemplatePreparationKit提取基因组DNA,建立20μlTaqMan探针RQPCR反应体系。对26份外科发热患者标本(血标本20份,腹腔引流液3份,胸水2份,胆汁1份)进行荧光RQPCR检测。结果引物和探针特异性好,标准曲线相关系数在0.991～0.999之间。在最低检测限(102拷贝/反应体系)以上,仪器对不同含量大肠杆菌样本检测的平均准确性为(112.19±7.48)%;批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(16.33±4.80)%和(16.03±7.80)%。血标本中大肠杆菌DNA平均提取效率为(38.40±14.05)%,提取效率平均CV为(20.57±16.92)%。含有同等量大肠杆菌模拟标本存放在-20℃或-70℃6个月内,大肠杆菌DNA拷贝数差异无显著性(P=0.130)。外科发热患者血中大肠杆菌阳性率高达30%,最高含量约为1.24×106个/ml;另外在胆汁及腹腔引流液标本中检测出的大肠杆菌DNA含量明显高于相同患者血中含量。结论RQPCR是一种快速、灵敏、特异、重复性好、能定量起始模板拷贝数的检测大肠杆菌DNA方法,可用于定量检测全血及其他体液标本中大肠杆菌含量。

主 题 词：实时定量PCR 大肠杆菌 DNA 肠黏膜屏障 发热 血 体液 

学科分类：0832[0832] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-635X.2006.02.002

馆 藏 号：203912124...