经典H-2分子mRNA探针的制备及在C57小鼠中枢神经系统原位杂交中的应用

作     者：刘建娥 沈宇清 李明莉 吴晓箐 史茜 张建琼 LIU Jian-e;SHEN Yu-qing;LI Ming-li;WU Xiao-jing;SHI Qian;ZHANG Jian-qiong

作者机构：东南大学医学院病原生物学与免疫学系发育与疾病相关基因教育部重点实验室江苏南京210009 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31070807) 教育部博士点基金资助项目(20100092110040) 

出 版 物：《东南大学学报（医学版）》 (Journal of Southeast University(Medical Science Edition))

年 卷 期：2013年第32卷第2期

页      码：135-140页

摘      要：目的:研究经典H-2基因在C57小鼠中枢神经系统中的表达谱,设计合成地高辛标记的经典H-2mRNA探针。方法:利用PCR扩增出针对经典H-2分子的特异性保守片段,然后将PCR产物纯化后与pGEM-T Easy载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中。测序后获得目的基因的单克隆,扩增并提取质粒,采用体外转录的方法合成地高辛标记的经典H-2 mRNA的正、反义RNA探针。运用原位杂交方法分析经典H-2基因在C57小鼠中枢神经系统中的表达情况。结果:成功构建了321 bp经典H-2 mRNA的正、反义探针,原位杂交方法检测到经典H-2 mRNA在出生后15 d小鼠中枢神经系统中反义探针有杂交信号,正义探针无杂交信号。结论:正义探针无杂交信号表明合成的321 bp经典H-2 mRNA反义探针具有特异性。

主 题 词：中枢神经系统 经典H-2 原位杂交 探针 小鼠 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-6264.2013.02.002

馆 藏 号：203919565...