尾型同源盒转录因子2 shRNA慢病毒表达载体的构建及其转染对结肠癌细胞生长的影响

作     者：王训凯 郑见宝 孙学军 王孝珑 余钧辉 李孝斌 WANG Xunkai;ZHENG Jianbao;SUN Xuejun;WANG Xiaolong;YU Junhui;LI Xiaobin

作者机构：西安交通大学第一附属医院普通外科陕西西安710061 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81101874 81172362) 陕西省科学技术研究发展计划资助项目(2011-K12-19) 陕西省科技统筹创新工程计划资助项目(2013KTCQ03-08) 

出 版 物：《中国普通外科杂志》 (China Journal of General Surgery)

年 卷 期：2016年第25卷第4期

页      码：529-534页

摘      要：目的:构建尾型同源盒转录因子2(CDX2)shRNA慢病毒表达载体,并观察下调CDX2基因其对结肠癌细胞生长的影响。方法:根据CDX2 m RNA序列设计shRNA,并合成shRNA的互补序列,通过连接酶链接到GV248载体上,用测序方法鉴定阳性克隆后,将构建好的慢病毒表达载体与慢病毒包装载体用Lpofectamine 2000共转染293T细胞,产生慢病毒颗粒并用稀释法进行滴度测定。将CDX2 shRNA慢病毒表达载体转染人结肠癌细胞SW480、HT29后,分别用q RT-PCR和Western blot检测CDX2 m RNA及蛋白水平,CCK8实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果:DNA测序鉴定证实,CDX2 shRNA表达片段正确插入GV248载体中,包装后的病毒滴度为1×109TU/m L;SW480、HT29细胞转染CDX2-shRNA慢病毒表达载体后,CDX2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(均P0.05)。结论:成功构建shRNA慢病毒表达载体,其转染结肠癌细胞后能有效地抑制CDX2基因的表达;下调CDX2基因对人结肠癌细胞的增殖无明显影响。

主 题 词：结肠肿瘤 基因,同源盒 RNA干扰 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3978/j.issn.1005-6947.2016.04.011

馆 藏 号：203920974...