猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：杨春杰 米雪 刘雪婷 蹇慧 刘芳 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 YANG Chun-jie;MI Xue;LIU Xue-ting;JIAN Hui;LIU Fang;CHEN Ying;WEI Zu-zhang;HUANG Wei-jian;OUYANG Kang

作者机构：广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 

基　　金：广西创新驱动发展专项资金项目(桂科AA17204057-1) 广西自然科学基金(2017GXNSFAA198138) 贵港市科学研究与技术开发计划项目(贵科攻1829012) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2020年第50卷第5期

页      码：563-569页

摘      要：为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测。研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×10^8copies/μL^2.92×10^2copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26%~1.57%之间。该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL。使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42%,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染。本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测。

主 题 词：猪肠病毒G型 实时定量PCR 检测方法 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0087

馆 藏 号：203922784...